Методы диагностики ВИЧ

Анализы на ВИЧ-инфекцию: особенности процедуры и расшифровка результатов

Все инфекционные заболевания нуждаются в своевременной точной диагностике. ВИЧ и СПИД — не исключение. Поставленный вовремя диагноз позволяет принять необходимые терапевтические меры и продлить пациенту жизнь. Как же определить наличие или отсутствие заболевания с максимальной точностью?

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

Вирус иммунодефицита человека, как и любой другой вирус, самостоятельно размножаться не может, для этого ему необходима живая клетка, в которую он «встраивает» свою генетическую информацию. После того как это происходит, зараженный человек становится носителем вируса, но долгое время никаких признаков инфицирования может не обнаруживаться.

В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

  • кандидоз полости рта и ЖКТ;
  • опоясывающий лишай (герпес);
  • неделями не спадающая высокая температура;
  • ночная потливость;
  • диарея;
  • частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.

При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Статистика
По данным Федерального научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИДом, на период январь–апрель 2016 года в России зарегистрирован 1 миллион ВИЧ-инфицированных людей. В первой половине 2016 года выявлено 30 000 новых случаев заражения.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

Качественный анализ

  • Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
    Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
  • Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

Количественный анализ

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
    Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
    Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Показания к назначению

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:

  • Резкая потеря веса.
  • Диарея, длящаяся более трех недель.
  • Лихорадка неясного происхождения.
  • Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
  • Лейкопения и лимфопения.
  • Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Проведение анализа на ВИЧ

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).

Расшифровка результатов исследования

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Качественный анализ на ВИЧ

  • Скрининговый — если антител в крови нет, то в ответе пишут: «Отрицательно». Если же антитела к ВИЧ обнаружены, проводится повторное исследование. В случае если и оно дало положительный результат, пробу исследуют методом иммуноблота.
  • Верификационный — если на тест-полоске обнаружены потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41, то ставят диагноз «ВИЧ». Другим вирусам соответствует свой набор белков.
    При этом важно учитывать, что метод иммуноблота позволяет точно установить наличие вируса лишь тогда, когда набор антител в крови является полным, а именно, если одновременно обнаружены белки: gp160, gp120, gp41 — то это однозначно трактуется как ВИЧ-инфекция. Но если хотя бы одного из перечисленных белков нет, например, отсутствует gp41, но есть gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторного проведения.

Количественный анализ на ВИЧ

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

  1. РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
  2. Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
  3. От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
  4. Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Сроки и стоимость анализа

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.

Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Для предварительной диагностики ВИЧ-инфекции в медицинской

  • Главная
  • Избранное
  • Популярное
  • Новые добавления
  • Случайная статья

практике применяют:

+A. ОБНАРУЖЕНИЕ AT МЕТОДОМ ИФА

Б. вирусологические методы

B. РСК

Г. биопробу

Д. иммунный блот

49. Для окончательной диагностики ВИЧ-инфекции применяют:

A. определение количества и соотношения Т- и В-лимфоцитов

Б. электронную микроскопию крови

+B. ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИТЕЛ В ИММУННОМ БЛОТЕ

Г. биопробу

Д. выделение гемокультуры вируса

50. Клинические признаки, при которых показано обследование на ВИЧ:

+A. длительные диареи

+Б. длительно текущие пневмонии

+B. необъяснимая потеря массы тела

+Г. саркома Капоши

Д. ГНОЙНЫЙ ЛИМФАДЕНИТ

58. При обнаружении ВИЧ-инфекции у беременной следует:

А. прервать беременность

+Б. назначить антиретровирусные средства

B. рекомендовать грудное вскармливание новорожденного

Г. рекомендовать смешанное вскармливание

Д. РОДОРАЗРЕШИТЬ естественным путем

Для скриннннгового обследования групп риска с целью первичного

выявления ВИЧ-инфицированных используют:

А. РТГА

+Б. ИФА

В. иммунный блоттинг

Г. ПЦР

Д. РАЛ

Для контроля эффективности проводимой антиретровирусной

терапии наиболее эффективными являются:

A. подсчет количества СД 4 лимфоцитов

Б. ПЦР для определения величины вирусной нагрузки

B. общий анализ крови

+Г. ПЦР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕЛИЧИНЫ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ И ПОДСЧЕТ

КОЛИЧЕСТВА СД 4 ЛИМФОЦИТОВ В ДИНАМИКЕ

Д. определение количества циркулирующих иммунных комплексов

62. Для лечения ВИЧ-инфекции применяют:

A. азалептин

+Б. АЗИДОТИМИДИН

B. азатиоприн

Г. азитромицин

Д. азафен

Укажите правильное утверждение в отношении ВИЧ:

A. ВИЧ содержит ДНК

Б. ВИЧ устойчев во внешней среде

B. на современном этапе эпидемии доминирует серотип ВИЧ2

+Г. Специфические белки оболочки ВИЧ представлены глипротеинами с молекулярной массой 120.41 ккал

Д. нуклеоид (сердцевина) ВИЧ представлена гликопротеином с молекулярной массой 160 кд

63.Пути передачи ВИЧ инфекции:

+A. вертикальный

Б. контактно бытовой

+B. половой

+Г. парентеральный

Д. воздуно капкльный

63.Гистологические изменения в лимфоузлах при острой вич инфекции:

A. лимфогистоцитарная инфильтрация

Б. воспалительные изменения

B склерозирование лимфоидной ткани

+Г. Гиперплазия лимфоидной ткани

Д. исчезновение структуры лимфоузла

63.Симптом тромбоцитопенической пурпуры при острой вич инфекции:

+A. носовые кровотечения

+Б. экхимозы, геморрагии, петехии

+B. кровоточивость десен, маточные кровотечения

+Г. Содержание тромбоцитов в пределах 40000 от 1 до 3 месяцев

Д. содержание тромбоцитов в пределах 40000 от3 до 6 месяцев

63. Макстмальная продолжительность третьей латентной стадии ВИЧ инфекции:

A. до 6 месяцев

Б. 6-12 месяцев

B. 2-5 лет

Г. Более 10-15 лет

+Д. более 15 лет

63.источником инфекции при ВИЧ являются больные:

+A. в инкубационном периоде

+Б. острой ВИЧ инфекции

B. хронической персистирующей лимфоаденопатией

+Г. Вирусоносители

Д. потребители инъекционных наркотиков

63.Белок-рецептор СД4 содержит клетки:

+A. Т лимфоциты Хелперы Т4

+Б. макрофаги

+B. моноциты

Г эритроциты

Д. эозинофилы

63.Основными этапами репликации ВИЧ являются:

+A. взаимодействие оболочечных белков вируса с рецепторными белками клетки мишени

Б. синтез дополнительной молекулы вирусной РНК

+B. активауия белков ВИЧ протеинкиназами клетки мишени

+Г. Синтез ДНК с помощью обратной транскриптазы

+Д. интеграция вновь образованной вирус специфической ДНК в геном пораженной клетки

63.Вирусные гены в составе ДНК клетки хозяина при ВИЧ-инфекции называются:

A. аномальная храмосома

Б. чужеродный ген

+B. провирус

Г. РНК ВИЧ

Д. нуклеокапсид

64.Белок ВИЧ, наиболее подверженный антигенным вариациями:

A. Р24

+Б. р7

B. р9

Г. Gp41

Д. gpl20

65. Структурная единица ВИЧ, обеспечивающая синтез ДНК на матрице РНК вируса:

A. внешний белок мембраны

Б. белки сердцевины вариона

+B. обратная транскриптаза

Г. Трансмембранный белок

Д. интеграза

Картинка (красный нос):

+A. саркома Капои

Б. криптоспороидоз

B. лимфома

Г. Бактериальная инфекция

Д. прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия

Картинка (язык):

Ответ: вирус Эбтейн-бар

Картинка (грудная клетка):

Ответ: опоясывающий герпес

РОЖА

1. Возбудителем рожи является:

A.стафилококк

Б.клебсиелла

+ B.БЕТА-ГЕМОЛИТИЧЕСКИЙ СТРЕПТОКОКК

Г.пневмококк

Д .энтерококк

2. Укажите правильное утверждение в отношении рожи:

+ Б. ВОЗБУДИТЕЛЕМ РОЖИ ЯВЛЯЮТСЯ БЕТА-ГЕМОЛИТИЧЕСКИЙ СТРЕПТОКОКК ГРУППЫ А

B. единственный источник инфекции- больной рожей

Г. больные рожей высоко контагиозны

Д. в настоящее время нередко наблюдаются внутрибольничные вспышки рожи

3. Укажите правильное утверждение в отношении рожи:

+ A. источником инфекции являются носители бета-гемолитического

стрептококка группы А

+ Б. характерно серозное воспаление в коже и слизистых оболочках

+ B. возможно рецидивирующее течение болезни

Г. ХАРАКТЕРНО ПОРАЖЕНИЕ КОЖИ ТУЛОВИЩА И ВОЛОСИСТОЙ ЧАСТИ ГОЛОВЫ,

+ Д. иммунитет не вырабатывается

4. Укажите правильное утверждение в отношении рожи:

A. рожа возникает только в результате эндогенного заражения

гемолитическим стрептококком группы А

Б. характерным проявлением рожи является развитие гнойного

вос­паления кожи и подкожной клетчатки

+ B. РОЖЕЙ БОЛЕЮТ ТОЛЬКО ЛИЦА, ИМЕЮЩИЕ ИНДИВИДУАЛЬНУЮ

ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ

Г. морфологические изменения при роже такие же, как при флегмоне

Д. после перенесенной рожи вырабатывается длительный иммунитет

5. При роже различают следующие формы болезни, :

+ A. первичную

Б. ПЕРВИЧНУЮ ХРОНИЧЕСКУЮ

+ B. повторную

Г. первичную с поздними рецидивами

+ Д. рецидивирующую

6. По характеру местного процесса различают следующие формы рожи,:

+ A. эритематозная

+ Б. эритематозно-буллезная

+ B. эритематозно-геморрагическая

Г. ГАНГРЕНОЗНАЯ

+ Д. буллезно-геморрагическая

7. При роже характерно:

+A. болезнь начинается с явлений общей интоксикации

+ Б. первые признаки поражения кожи появляются через несколько ча­сов

после начала болезни

+ B. участок поражения кожи имеет четкие границы

+г. характерна яркая гиперемия кожи

Д. ХАРАКТЕРНО НАГНОЕНИЕ В ОЧАГЕ ВОСПАЛЕНИЯ

8. Поражение кожи при роже характеризуется всем перечисленным,:

+ A. яркой гиперемией с четкими границами

+ Б. повышением температуры кожи в очаге воспаления

+ B. выраженным отеком мягких тканей

Г. РЕЗКОЙ МЕСТНОЙ БОЛЕЗНЕННОСТЬЮ

+ Д. наличием регионарного лимфаденита

9. Местные изменения при роже характеризуются :

+ A. умеренной болезненностью

+ Б. яркой гиперемией

+ B. отеком мягких тканей

Г. НЕЧЕТКОСТЬЮ ГРАНИЦ ОЧАГА

+ Д. частым образованием булл и геморрагии

10. Наиболее ранним симптомом при первичной роже является:

A. появление эритемы на коже

Б. боли в очаге поражения

+ B. ПОВЫШЕНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ С ОЗНОБОМ

Г. отек мягких тканей в очаге поражения

Д. боли в области регионарных лимфоузлов

Устойчивые к ВИЧ

Об авторе

Воронин Егор Анатольевич — доктор философии (PhD) по биологии, старший научный сотрудник Международной компании по созданию вакцины против ВИЧ (Global HIV Vaccine Enterprise, Нью-Йорк, США). Автор и соавтор 18 научных работ.

Ход болезни у конкретного человека определяется рядом факторов: общим состоянием организма и перенесенными ранее заболеваниями, разновидностью попавшего в организм микроорганизма, особенностями генотипа больного, наличием сопутствующих инфекций и т. п. Любое инфекционное заболевание у разных людей протекает по-разному. Для большинства болезней статистика типичных симптомов и сроков их протекания не включает в себя случаи, когда заболевание прошло «мягко» или вообще бессимптомно. И хотя такие ситуации обычно выпадают из поля зрения медиков, именно они представляют особый интерес, потому что могут указать на неизвестные механизмы защиты от инфекций. В этом смысле не является исключением и ВИЧ-инфекция, которая на сегодня считается неизлечимым заболеванием.

Практически с самого начала эпидемии ВИЧ были отмечены редкие случаи, когда человек оказывался полностью устойчивым к вирусу либо носительство вируса у него не переходило в стадию СПИДа. Исследования показали, что «виноват» в этом поверхностный лимфоцитарный белок CCR5, а точнее, его отсутствие у некоторых людей.

Дело в том, что когда вирус ВИЧ попадает в организм, он стремится проникнуть в лимфоциты — важнейшие иммунные клетки крови, участвующие в защите организма от инфекций. Чтобы суметь проникнуть в лимфоцит, белок оболочки на поверхности вируса должен связаться с двумя клеточными белковыми рецепторами на поверхности лимфоцитов, одним из которых и является белок CCR5 (Deng et al., 1996). Оказалось, что некоторые люди являются носителями мутации, которая предотвращает синтез СCR5, и, соответственно, их лимфоциты оказываются устойчивыми к заражению большинством вариантов ВИЧ.

Тимоти Рэй Браун (в центре) — первый и единственный на сегодня человек, исцеленный от СПИДа. Для лечения острого лейкоза ему по случайности был пересажен костный мозг от донора, имевшего мутацию белка ССR5, которая дает устойчивость к ВИЧ. Фото с flickr.com

Могут существовать и другие механизмы невосприимчивости к ВИЧ, о которых мы просто не знаем. Так, коллектив французских ученых, работавший с группой из 1700 ВИЧ-инфицированных людей, недавно опубликовал результаты исследования двух необычных случаев устойчивости к инфекции, которые не были связаны с отсутствием белка СCR5 (Colson et al., 2014). В первом случае диагноз пациенту был поставлен еще в 1985 г., однако, хотя он и не принимал никаких антивирусных препаратов, стандартные анализы указали на полное избавление от вируса. Ни в крови, ни в культуре клеток крови этого человека не были обнаружены следы присутствия «живого» вируса.

Конечно, в первую очередь возник вопрос — а был ли пациент действительно инфицирован, или исследователи столкнулись с редкой диагностической ошибкой? Однако дополнительные анализы показали, что факт заражения имел место: в его крови были обнаружены антитела к ВИЧ и отдельные фрагменты вирусных белков, а также ничтожные количества вирусной ДНК, которую удалось определить лишь с использованием высокочувствительных методов.

Исследователи попытались заразить лимфоциты, взятые от этого пациента, «лабораторным» вариантом ВИЧ. Однако эта попытка не удалась, в отличие от контрольных лимфоцитов, взятых у других пациентов. В этот раз исследователи точно установили, что на лимфоцитах необычного пациента белок CCR5 присутствует, и поняли, что они имеют дело с новым механизмом блокировки репликации генома ВИЧ.

Возможный ключ к объяснению этого феномена был найден в тех небольших количествах вирусной ДНК, которые все же удалось выделить из крови пациента. Анализ их нуклеотидной последовательности показал, что этот вирусный геном просто напичкан мутациями. Мутированными оказалось около четверти кодонов, кодирующих аминокислоту триптофан, которые в результате превратились в стоп-кодоны, останавливающие синтез белка.

Собственно говоря, механизмы иммунной защиты, которые могли таким образом инактивировать вирус, уже известны. ВИЧ относится к вирусам с РНК-геномом, и чтобы размножиться, он должен пройти стадию обратной транскрипции, т. е. РНК должна превратиться в ДНК. «Перехватить» вирусный геном на этой стадии может группа клеточных белков из семейства APOBEC3G. Они «отрывают» аминогруппу (–NH2) от цитозиновых нуклеотидов, превращая их в урациловые. В результате в геноме вместо комплементарных пар нуклеотидов «цитозин — гуанин» появляются пары «урацил — аденин». А поскольку в кодон триптофана входят два гуанина, их замена на аденин превращает триптофановый кодон в стоп-кодон (Sheehy et al., 2002).

Обычно ВИЧ удается обойти этот уровень защиты: у него имеется специальный белок, который атакует и уничтожает APOBEC3G. Но почему-то на сей раз этого не случилось, и весь жизнеспособный вирус оказался мутирован до состояния полной потери функциональности.

У обычного человека при заражении ВИЧ РНК-геном вируса успешно проходит стадию обратной транскрипции, в результате чего в клетке появляются полноценные копии вирусной ДНК (а). В случае вирусной невосприимчивости клеточные белки APOBEC3G, присоединяясь к вирусу, вызывают мутацию в его геноме в процессе обратной транкрипции. Мутированный ВИЧ теряет способность синтезировать необходимые ему белки и не может размножаться (б). По: palfir.com

Предположив, что этот случай может быть не единичным, исследователи стали искать среди своих полутора тысяч пациентов со схожим анамнезом. И нашли! У этого человека также не удалось стандартными методами обнаружить ДНК- или РНК-вирусы. В крошечных фрагментах вирусной ДНК, которые удалось обнаружить у него в крови, также присутствовало большое число мутаций, схожих с теми, которые были найдены в первом случае. Однако лимфоциты второго пациента оказались неустойчивы к заражению «лабораторным» вариантом ВИЧ, поэтому не исключено, что механизм устойчивости к вирусу у него иной.

Многообещающим направлением этой работы является дальнейшее исследование механизмов устойчивости лимфоцитов первого пациента в экспериментах по заражению «лабораторным» штаммом вируса. Предполагается, что у этого человека имеется редкий вариант гена APOBEC3G, который ВИЧ не способен обойти. Но хотя это и было бы интересной находкой, такое открытие, скорее всего, не будет иметь широкого практического применения, поскольку пользу от такой мутации могут получить только ее носители. Тем не менее остается надежда на то, что при исследовании обнаружатся какие-то неизвестные ранее иммунные механизмы защиты, что даст толчок к разработке новых лекарств или методов предотвращения инфекции ВИЧ.

Авторы этой работы выдвинули также гипотезу, что в защите клеток от повторного заражения ВИЧ свою роль могут играть «фрагменты» вируса в виде коротких белков, образующиеся в результате досрочной остановки белкового синтеза на новых стоп-кодонах. Эти белки могут осуществлять защитную функцию либо, например, конкурируя с какими-то необходимыми для вируса белками, либо каким-то особым образом стимулируя иммунитет. Высказано даже предположение, что наблюдаемое явление формирования вирусной устойчивости — это естественный процесс эндогенизации ВИЧ, т. е. эволюционный процесс, в результате которого вирусная нуклеиновая кислота становится частью генома другого вида (в данном случае — человека).

Это предположение не так уж и фантастично: наши геномы полны «следов» древних инфекций — заражений ретровирусами, которые умеют встраивать свой наследственный материал в нашу ДНК. Ведь если в геном носителя встраивается не патогенный, а инактивированный вирус, который к тому же дает защиту против повторной инфекции, то он имеет намного большие шансы распространиться в популяции. И если начать масштабный поиск людей, которые несут вирус с большим количеством инактивирующих мутаций, то у нас появится шанс наблюдать эндогенизацию ВИЧ в реальном времени.

Диагностика ВИЧ: методы и исследования

Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.

Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.

В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:

  • ИФА (иммуноферментный анализ).
  • Иммуноблот (иммунный блоттинг).

Также могут быть применены следующие методики:

  • Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
  • ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.

Метод исследования

Диагностический принцип

Достоверность

Время после заражения

Экспресс-тест ИХА

Выявление антител к ВИЧ

93-99%

с 3 недели

Скрининговый тест ИФА

Выявление антител к ВИЧ и антигенов вируса

Иммуноблот

Антитела к нескольким белкам ВИЧ

99,9%

с 5 недели

ПЦР

Исследуется генетический материал вируса

80%

с 5 дня

98%

со 2 недели

При проведении исследований важно использовать сверхточное оборудование и верно интерпретировать результаты анализов. В противном случае точность диагностики снижается. При этом специалисты считают, что рациональнее всего проводить исследования в следующей последовательности.

  1. Сначала экспресс-диагностика, основанная на методе ИХА.
  2. В случае положительного результата – еще один анализ крови по методу ИФА.
  3. Положительный второй результат – проводится дообследование методом ИФА или иммуноблоттингом.
  4. В исключительных случаях для окончательной постановки диагноза можно применить более сложный и дорогостоящий метод ПЦР.

Экспресс-тесты методом ИХА или скрининг ИФА, предполагающий серологическое иммуноферментное исследование крови, выполняются в течение 15-30 минут. Высокая скорость диагностики актуальна в неотложных случаях, при планировании срочных операций. Но для постановки окончательного диагноза необходимо использовать основной метод диагностики – иммунный блоттинг. Если результаты ИФА и иммунного блоттинга противоречат друг другу, то возможно проведение референс диагностики – анализ сразу двумя методами. К проведению ПЦР прибегают в исключительных случаях, т.к. это наиболее дорогостоящий метод исследования. Далее разберем каждый из методов диагностики более подробно.

Экспресс-тест ИХА

Иммунохроматографические тесты неплохо зарекомендовали себя в экспресс-диагностике ВИЧ. Визуально они выглядят как полоски, на поверхность которых наносят исследуемый биологический материал (кровь, слюна). Для получения результата потребуется всего 10-15 минут, по истечении которых на тесте проявится, или цветная и контрольная полоска – положительный результат, подтверждающий наличие антител к ВИЧ, или только контрольная полоска – отрицательный результат.

С недавнего времени американская компания OraSure Technologies наладила массовое производство экспресс-тестов для домашнего применения. Они отпускаются без рецепта, и при желании их может использовать каждый желающий. Однако необходимо учесть, что по точности диагностики ИХА уступает методу ИФА, а для постановки окончательного диагноза необходимо проведение иммуноблота.

Скрининговый тест ИФА

Принцип метода основан на способности искусственно созданных белков ВИЧ, улавливать вырабатывающиеся в организме человека специфические антитела. В результате взаимодействия, тест-система ИФА изменяет окрас индикатора. Полученные изменения цвета обрабатываются с помощью аппаратуры, которая выдает результат анализа. При этом необходимо учесть, что скрининговый тест предназначен для выявления не ВИЧ как такового, а антител к нему. А поскольку для их появления в организме, необходимо время, то целесообразнее всего проводить скрининг спустя 3-6 недель после факта возможного инфицирования. Для этого достаточно всего 5 мл крови из вены пациента, забор которой проводят натощак, т.е. спустя 7-8 часов после последнего приема пищи.

Помимо положительного или отрицательного результата, тест ИФА может дать ложноположительный или ложноотрицательный результат.

  • Ложноположительный – речь может идти об сходных по своей структуре антителах, которые вырабатываются в организме при аутоиммунных заболеваниях, множественных миеломах, алкогольном гепатите и других патологиях.
  • Ложноотрицательный – скорее всего, тестирование было проведено преждевременно или иммунная система слишком слаба и не вырабатывает антитела к ВИЧ.

При сомнительном результате тест проводится повторно.

Иммунный блоттинг

Иммуноблот – это основной метод диагностики ВИЧ, сочетающий иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску антигенов вируса. Для их выявления анализ проводят в три этапа:

  • подготовка нитроцеллюлозной полоски;
  • исследование пробы биологического материала пациента;
  • трактовка результата.

Таким образом, в ходе проводимого исследования, основные белки ВИЧ распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые проявляются при проведении иммуноферментной реакции и подтверждают наличие или отсутствие антител к антигенам ВИЧ. Полученные в ходе исследования иммунным блоттингом результаты считаются окончательными.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Главное отличие ПЦР от других методов диагностики – тест-система определяет ДНК вируса. С ее помощью можно выявить даже единичные вирусные частицы. Применение метода возможно уже на 5ый день после факта возможного инфицирования с точностью до 80%, что позволяет провести раннюю диагностику ВИЧ. Однако ПРЦ проводят только в исключительных случаях.

  • для постановки диагноза новорожденным, появившимся на свет от ВИЧ-инфицированных матерей;
  • при сомнительных результатах иммуноблота;
  • для оперативного исследования донорской крови;
  • для оценки уровня ВИЧ в крови инфицированного пациента.

Несмотря на высокую чувствительность метода ПЦР, он обладает меньшей диагностической чувствительностью к ВИЧ, что объясняется вариабельностью генома вируса. Поэтому для постановки окончательного диагноза данный метод не используется.

Новые и альтернативные методы диагностики ВИЧ

Недавно, сотрудниками Питтсбургского университета был разработан новый высокочувствительный тест для обнаружения скрытых вирусов – тест TZA. Для его проведения требуется меньше времени и крови пациента. Принцип действия TZA сводится к поиску гена, который активируется только при репликации вируса. Несмотря на то, что разработчики уверены в эффективности теста, большинство специалистов склоняется к тому, что TZA не сможет заменить существующие методы диагностики полностью, поскольку он характеризуется иным механизмом действия и не подходит абсолютно каждому ВИЧ-инфицированному пациенту.

Где и как можно пройти диагностику ВИЧ

Сегодня тест на ВИЧ-инфекцию не является проблемой. При желании пациента, кровь на анализ можно сдать анонимно и абсолютно бесплатно. Сделать это можно в медицинских организациях по месту жительства, в Свердловском областном центре профилактике и борьбы со СПИД (г. Екатеринбург, ул. Ясная, 46. Регистратура: (343) 383-30-18 Телефон доверия по проблеме ВИЧ/СПИД: (343) 310-00-31 (будни, с 9 до 20 часов).

Диагностика ВИЧ – дело сугубо добровольное. Однако есть четыре ситуации, для которых прохождение теста является обязательным:

  1. Донорство.
  2. Трудоустройство на работу, предполагающую непосредственный контакт с биоматериалом, который может содержать ВИЧ.
  3. Иностранные граждане.

Лица при призыве на военную службу, поступающие в военные учебные заведения.

Но и в этих случаях тестирование не может проводиться насильно, поскольку для любого медицинского вмешательства необходимо добровольное и осознанное согласие пациента. Именно осознанное, поскольку каждый из нас должен понимать важность своевременной диагностики ВИЧ.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Если выявить болезнь на ранней стадии и сразу приступить к ее лечению, то можно остановить передачу вируса от носителей к здоровым людям. Также раннее выявление актуально для предоставления социальной, психологической помощи и возможности диспансерного лечения. На сегодняшний день возможно излечение от данного недуга, но при условии, когда диагностика ВИЧ инфекции выявила раннюю стадию инфицирования. Это существенно продлевает жизнь больным, что есть для них немаловажно.

Есть ряд симптомов, которые должны вас насторожить и заставить отправиться на обследование:

  • Частое, необъяснённое утомление;
  • Потовыделение в ночное время суток;
  • Частые болевые ощущения в области головы;
  • Лихорадочное состояние, примерно до десяти дней, с температурой до 38,5С;
  • Диарейные проявления;
  • Беспричинная потеря веса за короткий промежуток времени.

Если в период диагностики будут иметь место проявления сыпи, фурункулеза и других проявлений, это облегчит выявление болезни. Лимфаденопатия или увеличенные лимфатические узлы могут говорить о возможной инфекции, чаще всего это узлы шейные, челюстные, подключичные, подмышечные и локтевые. Размер их диаметром около 2,5 сантиметров. При пальпации болезненность не ощущается, они плотного эластичного содержания, редко проявляются как сливание в конгломерат. При ВИЧ узлы чаще всего увеличиваются группами, сроком более чем на три месяца.

Нередко при ранних фазах болезни встречаются психоневрологические симптомы:

  • Тревожное поведение и ощущение;
  • Депрессивное состояние;
  • Неуверенная походка, шатание;
  • Ухудшение четкости зрения, его снижение;
  • Судороги;
  • Нарушение памяти;
  • Неадекватные действия и поступки, несвойственные человеку;
  • Ослабление чувств;

Признаки начальной фазы ВИЧ, на которые следует обращать свое внимание:

  • Сброс веса до 10%;
  • Обнаружение изменений на слизистой оболочке (дерматиты, фурункулы, псориазы, грибок ногтей, язвы и гингивиты);
  • Герпес у людей, возраст которых менее чем 50 лет;
  • Рецидив инфекций респираторных путей.

Вторая фаза недуга развернута списком суперинфекций при иммунодефиците:

  • Сброс веса более чем на 10%;
  • Диарея, длящаяся более месяца;
  • Кандидоз, поражающий полость рта;
  • Туберкулезное поражение органов, лейкоплакия;
  • Нейропатия, саркома Капоши, герпетические процессы;
  • Бактериальные инфекции, проявляющиеся в тяжелой форме;

Последняя фаза диагностирования болезни может включать в себя:

  • Пневмонию;
  • Токсоплазмозы;
  • CMV-инфекцию;
  • Криптококкозы;
  • Герпесные проявления;
  • Лейкоэнцефалопатию с множеством очагов;
  • Гистоплазмоз, эзофагит;
  • МАК-инфекцию;
  • Туберкулез и многие другие заболевания в более осложненной степени.

Лабораторные методы – это выявление СПИД-ассоциированных отклонений у пациента инфицированного второстепенным иммунодефицитом. Болезнь ВИЧ содержит 23 нозологических вида, уместен синдромальный подход к определению более точного диагноза.

Выявление ВИЧ основывается на установлении антител к ВИЧ и вирусных антигенов, а в некоторых случаях выявляется провирусная ДНК ВИЧ и вирусная РНК ВИЧ (у грудных детей до 1 года). Лабораторная база выступает в трех направлениях: определение ВИЧ и его составляющих, обнаружение анти-ВИЧ, установление перемен в функциональности иммунной системы. Составляющая ВИЧ– это структурные гены gag, pol, а также env, именно они кодируют белковую трансляцию на базе непосредственного строения вируса.

Регуляторные гены – это объединение tat, rev, vif, nyf, vpx и vpr. Ген gag шифрует сердцевинные белки с начальными продуктами трансляции, pр53 – предшествующий белок, который имеет свойство расщепляться на p15, p17 и p24 или р39, с последующим расщеплением на p17 и р24. У пациента возникают антитела к акразкэтому антигену, акр 24 можно выявить на начальных фазах инфицирования, так как р24 иммуногеннее, нежели р17.

Гены типа pol шифруют белки p51/66 и p31, выступающие реверстранскриптазом и эндонуклеазом вируса. Выявляют антитела при использовании иммуноферментного анализа (ИФА) ииммуноблотинга (ИБ). Не редкость ложноположительных результатов ИФА у страдающих аутоиммунным заболеванием в дуэте с инфекциями, после вируса Эпштейна-Барра, но это бывает в 0,05 % случаев.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *